Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展减慢的过程中逐渐扩展

从第一次消失人形体内自身特异性到消失1改型肝炎病患病征的十分困难率在婴幼儿中期就有良好的揭示，多个人形体内自身特异性中性的婴幼儿中都有70%在血液切换后10短期内患有肝炎，而随访15年的婴幼儿这一%-提高到84%。即便如此，占去病患1改型肝炎一半以上的改型1改型肝炎的胃癌机制还没取得充分的研究者。

越来越多的人开始可用分阶段系统来判别1改型肝炎的十分困难：个形体在消失多种人形体内自身特异性时离开第1过渡阶段，消失皮质醇异常时离开第2过渡阶段，消失病征时离开第3过渡阶段。一些多发人形体内自身特异性中性的个形体，在1期和2期，十分困难很慢，并发展为胃癌的1改型肝炎。我们以前揭示了一第三组在首次测定到多种人形体内自身特异性抽样后据估计10年无肝炎的近乎慢十分困难者，这第三组病征数目少，但特性非常明确。随后，我们发现人形体内自身淋巴细胞特异性CD8+T蛋白质反理应在十分困难平稳的病征中都基本不存有，但在近来胃癌和长期存有的肝炎病征中都很容易测定到。这也许证明，与十分困难病征来得，这些病征自身免疫反理应的通气增强。

后期研究者证明，尽管通气性T蛋白质(Treg)量正常，但肝炎病征存有一些机能缺陷，其中都仅限于对IL-2的反理应技能减少。此外，肝炎病征中都的效理应CD4+T蛋白质也许对通气来得具抵抗性，表现为效理应T蛋白质的诱导移向，自然导致的Treg和形灌注导致的诱导Treg，以及淋巴细胞经历的CD4+T蛋白质中都IL-2反理应移向。本研究者的借以是揭示了CD4+通气性T蛋白质(Treg)在一小群近乎平稳十分困难者中都的特性，他们的平均岁数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

法则：BOX研究者是一项以人群结合的纵向研究者，在21岁以下确诊的病征亲属中都检查1改型肝炎的危险因素。我们以前揭示了长期平稳十分困难者的特性，他们持续保持多重人形体内自身特异性中性超过10年，但没消失肝炎的病患病征，慢性或非展开性自身免疫。随后，10名继续持续保持无肝炎并主动提供大量血液抽样的平稳十分困难者归入T和B蛋白质机能统计分析。在在此以前的研究者中都，8名慢十分困难者(SP第三组)，中都位岁数43岁(31-72岁)，18 - 32岁相互间的人形体内自身特异性中性。所有的行动者都东南面1改型肝炎十分困难的1期，尽管一些人随后一落千丈了人形体内自身特异性对某些淋巴细胞的中性反理应，然而，一名病征已经东南面2期据估计6年，但没消失病患病征，一名病征被病患为肝炎，该受试者72岁，在搜集测试抽样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据统计分析中都对该供形体展开了单独分析。分立外周血单个核蛋白质(PBMCs)，采用多参数流式蛋白质练成和T蛋白质诱导筛选分析供形体中都Treg的高频率、表改型和机能。可用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和紧接著)展开无监理聚类统计分析，分析Treg表改型。

结果：与生活品质供形体来得，来自慢十分困难形体的无意识CD4+T蛋白质的监理聚类揭示，激光阴的无意识CD4+ Treg高频率提高，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)表述提高有关。一名HbA1c升高的病征与十分困难平稳者和也就是说的对照第三组来得，Treg明人并不相同。机能统计分析证明，与生活品质供形体来得，来自平稳十分困难形体的Treg介导的CD4+效理应T蛋白质诱导值得注意损坏。表现为对效理应CD4+T蛋白质CD25和CD134表述的诱导提高。

三幅1 侧重的表改型统计分析揭示，CD4+Treg亚改型在慢十分困难函数调用中都提高。由FlowSOM聚合的Treg楼内，聚集在来自所有供形体的光阴CD4+CD45RA -蛋白质上。根据标明物表述鉴定显露10个元簇:无意识T蛋白质_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T蛋白质;HLA-DR + GITR +无意识T蛋白质;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)可用9个不同Treg标明聚合的10个元簇的MST。每个路由表象征性一个战略性(100个战略性)，来得大的元战略性(10个元战略性)在路由表第三组周边上色。每个路由表中都的饼三幅回应单个标明的表述级别。(b)每个元聚类的热三幅，以揭示整形体标明表述。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)聚合三幅，以及FlowSOM辨别的每个元簇的覆盖层。(e-l)来得较重元素为每个metacluster盒终点站三幅(重元素> 0.05%)已确定为HD和SP第三组:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T蛋白质(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T蛋白质(l)。红色格长子象征性**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon筛选符号秩筛选。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 可用CITRUS的预测模改型证实，Treg高频率的提高是十分困难平稳的标识。分级离长子通道(a - f)和柑橘统计分析(g-k)来得为SP行动者和也就是说的HD行动者在CD4+CD45RA−T蛋白质上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群形体的象征性性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3钼，然后通过HLA-DR和GITR表述展开分立，建模FlowSOM群形体。(b) HD(白斑)和SP(蓝点)第三组以及供形体SP 606(红色)中都CD25+ cd127的高频率汇总三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+离长子通道长子集的盒终点站三幅;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述风力纹理，上标突显露的簇被辨别为SP和HD函数调用相互间的不同。(j)盒终点站三幅揭示了在SP(蓝点)和HD(灰点)第三组中都，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的来得较重元素(%-)。(k)平方和揭示每个簇的表改型(红色)和Treg标明来得较表述与历史背景表述(红色);上列，寄存器Treg_3;下面正要，寄存器Treg_4。历史背景与所有其他簇中都标明的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon筛选符号秩筛选

三幅3 与生活品质献血者来得，十分困难平稳者无意识treg的GITR提高。每个无意识CD4+T蛋白质元簇(无意识T蛋白质_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T蛋白质;HLA-DR + GITR +无意识T蛋白质;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个表述标明的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的表述热三幅(sp606不仅限于在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇中都所有HD(白色)、所有SP(红色)和SP 606(红色)的FlowSOM GITR表述串联，揭示平方和(c)和汇总三幅(d)。Wilcoxon筛选符号秩和筛选，p< 0.07(红色)所有供形体仅限于，p< 0.05(红色)供形体SP 606和也就是说的HD不仅限于在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR表述，从分级离长子通道，从所有HD(白色)、所有SP(红色)和SP 606(红色)串联，揭示平方和(e)和汇总三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon筛选符号秩筛选

三幅4 来自平稳十分困难的CD4+ treg蛋白质控制效理应CD4+T蛋白质的技能减少。SP第三组用红色的终点站和格长子回应，HD第三组用红色的终点站和格长子回应，红色的终点站/格长子回应供形体sp606。可用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质展开分选。CD4+CD25−(理需要的话者)被标明为CFSE, Treg按捕捉到的%-硫酸铜。用抗CD3 /28微珠再造蛋白质，养成3天后展开流式蛋白质练成测定。(a-d)与CD4+理需要的话者来得较理应的treg养成(继发性)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD理需要的话者养成。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE诱导%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱导%-。可用中性对照(激光阴的响理应蛋白质不含treg)算显露诱导%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重来得为测试

三幅5 效理应CD4+T蛋白质对平稳十分困难的T蛋白质再造的诱导来得敏感。SP第三组用红色的终点站和格长子回应，HD第三组用红色的终点站和格长子回应，红色的终点站/格长子回应供形体sp606。可用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质展开分选。CD4+CD25−(理需要的话者)被cfsel标明，treg按捕捉到的%-硫酸铜。用抗CD3 /28微珠再造蛋白质，养成3天后展开流式蛋白质练成(CD25反染)和蛋白质因长子统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606理需要的话者共同养成。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE诱导前年(b)。(c,d) CD25诱导前年(c)和CD134诱导前年(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共养成中都的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重来得为测试

假设：我们得显露的假设是，来自平稳十分困难长子的再造无意识CD4+Treg在GITR表述中都取得了扩展和丰富，强调了进一步研究者Treg在1改型肝炎高风险个形体中都的异质性的有效性。

原文来历：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28